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　　抑菌環(huán)是在抗菌藥物敏感性試驗(yàn)中出現(xiàn)的一種直觀現(xiàn)象。當(dāng)將含有抗菌藥物的紙片放置在已接種測(cè)試菌的瓊脂培養(yǎng)基表面時(shí)，抗菌藥物會(huì)從紙片向周圍瓊脂中擴(kuò)散，形成以紙片為中心、濃度由高到低向外遞減的梯度。抑菌環(huán)試驗(yàn)相關(guān)方法步驟有哪些？

　　在抗菌藥物濃度高于最小抑菌濃度（MIC）的區(qū)域，細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制，從而在紙片周圍形成一個(gè)透明的、沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)的環(huán)形區(qū)域，這個(gè)區(qū)域就被稱為抑菌環(huán)。抑菌環(huán)的大小反映了抗菌藥物對(duì)測(cè)試菌的抗菌活性強(qiáng)弱，抑菌環(huán)直徑越大，通常表明該抗菌藥物對(duì)測(cè)試菌的抑制作用越強(qiáng)；反之，則抑制作用越弱。

　　抑菌環(huán)試驗(yàn)方法步驟

　　（一）實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

　　實(shí)驗(yàn)材料：準(zhǔn)備好瓊脂培養(yǎng)基（如M-H瓊脂培養(yǎng)基，常用于細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)）、無(wú)菌平皿、無(wú)菌棉簽、抗菌藥物紙片（需從正規(guī)渠道購(gòu)買，確保質(zhì)量和效期）、標(biāo)準(zhǔn)菌株或臨床分離菌株、恒溫培養(yǎng)箱等。

　　培養(yǎng)基制備：按照培養(yǎng)基說(shuō)明書(shū)準(zhǔn)確配制瓊脂培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)pH值至規(guī)定范圍（一般M-H瓊脂培養(yǎng)基pH為7.2-7.4）。將配制好的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌（通常121℃，15-20分鐘），滅菌后待培養(yǎng)基冷卻至50℃-55℃左右，在無(wú)菌條件下倒入無(wú)菌平皿中，使培養(yǎng)基厚度均勻，約4mm（可通過(guò)控制倒平板的培養(yǎng)基體積實(shí)現(xiàn)，一般90mm平皿倒入15-20mL培養(yǎng)基），待培養(yǎng)基凝固備用。

　　菌液制備：從新鮮培養(yǎng)的斜面上挑取純培養(yǎng)的測(cè)試菌株，接種到合適的液體培養(yǎng)基中（如營(yíng)養(yǎng)肉湯），在適宜溫度下（一般35℃-37℃）振蕩培養(yǎng)4-6小時(shí)，使細(xì)菌處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。使用濁度計(jì)或比濁法，將菌液濃度調(diào)整至0.5麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)（相當(dāng)于1.5×10?CFU/mL左右），若沒(méi)有濁度計(jì)，也可與0.5麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)管目視比濁進(jìn)行調(diào)整。

　　（二）接種與貼片

　　接種：用無(wú)菌棉簽蘸取調(diào)整好濃度的菌液，在試管內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)擠壓，去除多余菌液，然后在瓊脂培養(yǎng)基表面均勻涂抹接種，重復(fù)涂抹3次，每次旋轉(zhuǎn)平皿約60°，最后沿平皿邊緣涂抹一周，確保整個(gè)瓊脂表面均勻接種細(xì)菌。

　　貼片：待接種后的培養(yǎng)基表面水分稍干（約5-10分鐘），用無(wú)菌鑷子或紙片分配器將抗菌藥物紙片貼于培養(yǎng)基表面。紙片一旦貼上，不得移動(dòng)，各紙片中心間距應(yīng)不小于24mm，紙片距平皿邊緣應(yīng)不小于15mm。每個(gè)平皿一般貼4-6張紙片為宜，避免紙片間抗菌藥物擴(kuò)散相互影響。

　　（三）培養(yǎng)與結(jié)果觀察

　　培養(yǎng)：將貼好紙片的平皿倒置（防止冷凝水滴落影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果），放入恒溫培養(yǎng)箱中，根據(jù)測(cè)試菌株的特性設(shè)置適宜的培養(yǎng)溫度和時(shí)間。一般細(xì)菌在35℃-37℃培養(yǎng)16-18小時(shí)，苛養(yǎng)菌（如肺炎鏈球菌等）需在含5%-10%CO?的環(huán)境中培養(yǎng)18-24小時(shí)。

　　結(jié)果觀察：培養(yǎng)結(jié)束后，取出平皿，在黑色背景、散射光下測(cè)量抑菌環(huán)直徑（精確到毫米）。測(cè)量時(shí)，應(yīng)測(cè)量包括紙片直徑在內(nèi)的抑菌環(huán)直徑，從平板背面直接測(cè)量最接近的毫米數(shù)。記錄每種抗菌藥物紙片的抑菌環(huán)直徑，并根據(jù)CLSI（美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)）或EUCAST（歐洲抗菌藥物敏感性試驗(yàn)委員會(huì)）制定的標(biāo)準(zhǔn)，判斷測(cè)試菌對(duì)該抗菌藥物的敏感性（敏感、中介或耐藥）。